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寻采用不同比例的淀粉的发酵液培养枯草芽孢杆菌进行发酵最佳工艺
实验菌种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtillis)1．210；D53、D56：从活性污泥中分离得到。 培养基的配制斜面培养基(营养琼脂)：蛋白胨1％，NaC1 0．5 D／0，牛肉膏0．3％，琼脂2％。
液体营养肉汤培养基：蛋白胨1％，NaC1 0．5％，牛肉膏0．5％。 淀粉酶试验培养基：在营养琼脂培养基中加2％的可溶性淀粉即成。 以上3种培养基的pH值均为7．2～7．4，分装后121℃灭菌20min。 产淀粉酶发酵培养基：玉米粉8％，蛋白胨0．5％，豆饼粉4％ ，K~HPO 5％ ，(NH4)2SO 0．4％ ，pH值自然，0．05MPa灭菌20min。 试剂与仪器设备试剂：革兰氏染色染色试剂，Taq E，dNTPs(4种脱氧核苷三磷酸)，6x loading Bufer，50x TAE(用时稀释成lx TAE)，引物片断：27f5’一agagttgatcctggctcag一3’，1492r5’．ggttaccRgttacgacf一3’，引物浓度：1OD稀释至~L，琼脂糖，Goldview(用于替代EB的染料)，D2000 DNA Maker。 仪器与设备：DYY．III33B型电泳槽，MJResearch．PTC．200PCR仪，灭菌锅，离心机，37％ 恒温培养箱，水浴锅。 取样、富集培养取样时将水和污泥一起取来，静置使污泥沉降，待污泥沉降后直接用灭菌过的移液管吸取1．0mL上清液，注入无菌水中，稀释适宜的倍数，以无菌操作注入固体培养基平板中。 倒置放入生化培养箱中，37％富集培养24h-36h。 菌种的鉴定形态学观察：取少量菌种制成玻片，通过革兰氏染色，在显微镜下观察菌落形态特征。 生理生化鉴定：根据《常见细菌系统鉴定手册》进行鉴定。 16SrRNA同源性比较：取菌株D53、D56的48h的平板培养物为模板，配制50 L地体系，进行PCR扩增。 PCR反应体系：ddH2O 381~L，10×Taq E Bufer 5 L，dNTPs(2．5mmol／L)41~L，引物1(27D1 L，引物2(1492r)1IxL，离心混匀，分装。 再分别加入模DNA O．5 L，TaqE(5U／~L)0．51xL，离心混匀。 制胶：l％琼脂糖(1g琼脂加100mL 1×TAE(电泳缓冲液))，再在lOOmL琼脂糖中加1 L～2 LGoldView。 电泳缓冲液：l×TAE倒入电泳槽中直至没过胶面并高出3～5mm。 点样：6xLoadingBufer(点样缓冲液)llxL，DNA51xL。 电泳：点好样后，设定电泳条件：电压150V，30min。 PCR反应条件：94℃、5min；(94℃、1min；52℃、1min72℃、2min)25个循环；72℃、10min，4℃ 保温。 PCR产物经脱盐纯化后，由北京华大中生科技发展有限公司进行测序，要求双向测通，将拼接后的测序结果输入、 州．NCBI．nlm．nih．gov，利用BLAST软件，将测定得到的基因序列与Genbank数据库的序列作比对分析，进行同源性比较。 分离菌株的产淀粉酶透明圈试验按参考文献[8]方法分别将D53、D56斜面菌株接入养肉汤液体培养基的试管中，37％培养24h后，分别划线接种于淀粉酶试验培养基中，作2个平行。 通过稀释菌液以使在平板上出现单菌落。 将接好的平板置于37~C恒温培养箱中培养24h，取出后分别滴加现配制的路哥氏碘液，全部漫过平板，放置片刻，即可对其透明圈进行观察和测量。 菌株产淀粉酶粗酶活的测定酶活力定义：lmL酶液于60％、pH6．0的条件下，在1h内催化2％可溶性淀粉成为糊精的克数为1个酶活力单位。 将保存在斜面的菌株，分别接入发酵培养基中，37％、200r／min培养44h后，分别取发酵液测定酶活。
抗生素效价的管碟法（二剂量）测定抗生素的效价
抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法（cylinder plate method）。 管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。 管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径6.0±，外径8.0±，高10±），管内放入标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，抗生素扩散的有效范围内则产生透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈（图实验-18）。 抑菌圈直径大小与抗生素浓度相关，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。 抗生素效价常采用二剂量法。 将抗生素标准品和供试品各稀释成一定浓度比例（2:1或4:1）的两种溶液，在同一平板上比较其抗药活性，再根据抗生素浓度对数和抑菌圈直径成直线关系的原理来计算供试品效价。 取含菌层的双层平板培养基，每个平板表面放置4个小钢管，管内分别放入检品高、低剂量和标准品高、低剂量溶液。 先测量出四点的抑菌圈直径，按下列公式计算出检品的效价。 (1) 求出W和V：(2) W=（SH+UH）-（SL+UL）(3) V=（UH+UL）-（SH+SL）式中： UH：供试品高剂量之抑菌圈直径UL：供试品低剂量之抑菌圈直径SH：标准品高剂量之抑菌圈直径SL：标准品低剂量之抑菌圈直径求出θ：（2） θ=D·antilog（IV/W）式中：θ：供试品和标准品的效价比D：标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般为1I：高低剂量之比的对数，即log2或log4。 求出Pr ： (5) Pr = Ar×θ 式中：Pr：供试品实际单位数Ar：供试品标示量或估计单位 （1）细菌：短小芽胞杆菌[CMCC（B）]的芽胞悬液。 （2）培养基：效价检定用培养基（上层、底层）。 （3）抗生素：抗生素检品及标准品（高剂量、低剂量，高剂量与低剂量之比为2:1）。 （4）试剂与器材：灭菌生理盐水，无菌平皿，牛津杯，无菌吸管，镊子，滴管，直尺。 （1）取无菌平皿，加入20ml底层培养基，凝固后作为底层。 （2）用灭菌生理盐水将短小芽胞杆菌的芽胞悬液稀释至一定浓度以能得到清晰的抑菌圈，且标准品高浓度所得抑菌圈直径在18~22mm为基准。 用无菌吸管吸取1ml芽胞悬液，加入到200ml恒温于50℃的上层培养基中摇匀，迅速以无菌吸管吸取5ml，注入到底层培养基上，铺平待凝。 （3）在平板底部四边，分别对角注明“SH”、“SL” 和“UH”、“UL”标记。 （4）镊子火焰灭菌3次，然后夹取4个牛津杯垂直放置在平板中标志附近（注：勿使钢管陷入培养基内，各小杯之间尽量等距）。 （5）以无菌滴管分别在每个牛津杯内加入相应的抗生素溶液至满但不溢出管外，且四杯内液面高度相同，盖上平皿盖，静置30分钟。 （6）将平皿置于37℃恒温培养箱培养16~18 h，量取各抑菌圈直径（SH、SL、UH、UL），以毫米为单位，误差不超过0.1mm。 （7）计算抗生素效价（8）查放线图计算抗生素效价
vf程序设计怎么打印时钟？
在表单中添加timer和lable等控件将timer的Interval属性设置为500,Enabled属性设置为.t.示例:timer的timer事件代码如下=time()
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